人结肠成纤维细胞永生化
永生化人结肠成纤维细胞分离自结肠组织；结肠在右髂窝内续于盲肠，在第3骶椎平面连接直肠。结肠分升结肠、横结肠、降结肠和乙状结肠4部分，大部分固定于腹后壁，结肠的排列酷似英文字母“M”，将小肠包围在内。结肠横切面由内到外依次为：黏膜（上皮层、固有层、黏膜肌层），黏膜下层（疏松结缔组织），肌层（内环形、外纵行两层平滑肌），外膜（纤维膜或浆膜）。结肠成纤维细胞主要分布于外膜（纤维膜或浆膜）结缔组织内。成纤维细胞分泌富含I型和III型胶原的非刚性细胞外基质。该细胞负责结蹄组织中细胞外基质的大量合成。许多疾病均与成纤维细胞有关，或是因为该细胞可涉及这些疾病的病因学，或是因为呈纤维化会对组织中其它细胞类型造成伤害。 本公司生产的永生化人结肠成纤维细胞采用混合酶和SV40T制备而来，细胞总量约为5×105个/瓶；细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
产品详情
1) 收到细胞后，请先检查培养瓶是否完好，培养基是否外渗、浑浊，并核对瓶身上的标签信息、细 胞数量是否与发货清单一致。如有异常情况，及时与我们联系。
NOTE:培养瓶内漂浮的小体积絮状物可能是脱落的细胞，建议在培养箱静置 2h 后再观察，如仍有细胞 未贴壁，可收集培养上清离心后再接种到原瓶或新的培养容器中。
2) 用 75%酒精消毒细胞培养瓶表面，不要打开培养瓶，将细胞平放于细胞培养箱内静置 1~2h,待细胞恢复基本生长状态后，再进行后续操作。
3) 将原瓶中的完全培养基移入无菌培养瓶中，用于培养细胞。4) 显微镜下观察细胞状态:若汇合度低于 80%，预留 5 mL 培养基在原瓶中继续进行培养。若细胞汇合度高于 80%，可进行传代。后续根据细胞汇合度继续培养或消化传代。
传代：
1) 预热 1×PBS、胰酶和完全培养基。
2) 吸去原培养基。用 1×PBS 洗涤细胞 2~3 次。
3) 吸去 1×PBS。加入胰酶。轻轻旋转，使胰酶覆盖细胞表面，消化，显微镜下观察约70%~80%左右的细胞变圆后，用手轻拍培养器皿外壁使细胞脱壁。
4) 当观察到细胞明显脱落，立即加入预热的完全培养基终止消化。用吸管吸取液体，反复轻柔吹打培养器皿底壁，使细胞彻底脱离器皿底壁。
NOTE:建议可添加 2 倍胰酶用量的完全培养基用于 终止消化。5) 将细胞悬液转移到离心管中。用 1xPBS 清洗底壁，收集细胞悬液至离心管中。
6) 250g离心5min。
7) 小心弃去上清液，加入 1~2mL 完全培养基重悬细胞。
8) 选择合适的培养器皿，加入适量完全培养基，按照合适的传代比例(一般为 1:2)接种细胞，“划十字”摇晃细胞培养器皿，使细胞均匀分布。
9) 把细胞放入 37°C，5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。