IPSC复苏|传代|冻存

训练目标

1. 掌握 iPSC 细胞复苏操作流程，理解多能干细胞复苏存活率关键影响因素

2. 熟练完成 iPSC 克隆传代，学会机械挑克隆、酶消化传代两种主流操作

3. 掌握 iPSC 程序冻存方法，学会冻存液配置、细胞分装、梯度降温操作

4. 学会 iPSC 细胞形态观察，分辨优质克隆、分化克隆，排查污染、凋亡等常见问题

5. 建立 iPSC 无菌操作规范，降低培养过程分化、污染风险

课程大纲

1. iPSC 细胞培养基础理论

   • iPSC 生物学特性，培养体系与基质胶要求

   • iPSC 分化诱因、培养风险点解析

2. iPSC 细胞复苏实操

   • 冻存细胞复苏解冻、重铺基质胶培养板

   • 复苏后细胞状态观察与换液策略

3. iPSC 传代实操

   • 机械挑取未分化克隆传代

   • 酶消化法批量传代操作要点

   • 传代密度把控，培养条件设置

4. iPSC 细胞冻存实操

   • 冻存细胞收集、细胞活率检测

   • 冻存液配制、细胞分装

   • 梯度降温、程序冻存、液氮保存流程

5. 质控与常见故障排查

   • 合格 iPSC 克隆形态判读

   • 细胞分化、碎片多、污染、复苏死亡高问题分析与解决方案

适合人群

• 拟开展 iPSC、类器官前期细胞制备的研究生、实验员

• 零基础接触多能干细胞培养，缺少实操经验人员

• 经常出现 iPSC 分化、复苏存活率低，需要规范操作的科研人员

训练时长

2 天实操（理论 + 动手实操）