iPSC 鉴定
验证重编程后细胞是否具备多能性、遗传稳定性与生物安全性，确保其符合 iPSC 细胞系标准，为后续科研与临床应用提供可靠依据。
1、多能性标记物检测
碱性磷酸酶（AP）染色：快速筛选阳性克隆，iPSC 会呈现典型的红色 / 紫色染色信号。
免疫荧光染色：检测核心多能性蛋白（Oct4、Sox2、Nanog、Tra-1-60、Tra-1-81 等），确认蛋白表达定位与强度。
qPCR/RT-PCR：定量检测多能性基因（Oct4、Sox2、Nanog、Lin28 等）的转录水平，对比体细胞样本验证表达上调。
2、分化潜能验证
拟胚体（EB）形成实验：体外诱导形成 EB 结构，验证三胚层分化能力，通过免疫荧光或 qPCR 检测外胚层（Nestin、Pax6）、中胚层（Brachyury、α-SMA）、内胚层（AFP、GATA4）标记物。
畸胎瘤形成实验（可选）：将 iPSC 注射至免疫缺陷小鼠体内，观察是否形成包含三胚层组织的畸胎瘤，是体内多能性的金标准。
3、、遗传与表观遗传稳定性检测
核型分析：通过 G 显带 / SNP 芯片检测染色体数目与结构异常，排除重编程过程中的染色体畸变。
STR / 基因型鉴定：确认细胞系来源与供体一致，避免细胞交叉污染。
甲基化分析：检测 Oct4、Nanog 等多能性基因启动子区去甲基化状态，验证表观遗传重编程完成。
4、生物安全性检测
支原体 / 微生物检测：通过 PCR 或培养法排除支原体、细菌、真菌污染。
外源整合检测（针对非整合型重编程）：PCR / 测序验证重编程载体（如仙台病毒、episomal 质粒）已被有效清除，无外源序列残留。
致瘤性评估（临床导向）：通过体外软琼脂克隆形成实验或体内异种移植，评估细胞致瘤风险。
碱性磷酸酶（AP）染色：快速筛选阳性克隆，iPSC 会呈现典型的红色 / 紫色染色信号。
免疫荧光染色：检测核心多能性蛋白（Oct4、Sox2、Nanog、Tra-1-60、Tra-1-81 等），确认蛋白表达定位与强度。
qPCR/RT-PCR：定量检测多能性基因（Oct4、Sox2、Nanog、Lin28 等）的转录水平，对比体细胞样本验证表达上调。
2、分化潜能验证
拟胚体（EB）形成实验：体外诱导形成 EB 结构，验证三胚层分化能力，通过免疫荧光或 qPCR 检测外胚层（Nestin、Pax6）、中胚层（Brachyury、α-SMA）、内胚层（AFP、GATA4）标记物。
畸胎瘤形成实验（可选）：将 iPSC 注射至免疫缺陷小鼠体内，观察是否形成包含三胚层组织的畸胎瘤，是体内多能性的金标准。
3、、遗传与表观遗传稳定性检测
核型分析：通过 G 显带 / SNP 芯片检测染色体数目与结构异常，排除重编程过程中的染色体畸变。
STR / 基因型鉴定：确认细胞系来源与供体一致，避免细胞交叉污染。
甲基化分析：检测 Oct4、Nanog 等多能性基因启动子区去甲基化状态，验证表观遗传重编程完成。
4、生物安全性检测
支原体 / 微生物检测：通过 PCR 或培养法排除支原体、细菌、真菌污染。
外源整合检测（针对非整合型重编程）：PCR / 测序验证重编程载体（如仙台病毒、episomal 质粒）已被有效清除，无外源序列残留。
致瘤性评估（临床导向）：通过体外软琼脂克隆形成实验或体内异种移植，评估细胞致瘤风险。